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          如何保證PCR的特異性? 除了引物,退火溫度,最重要的就是采用熱啟動PCR!

          發布日期:2019年10月28日   瀏覽次數1281
          熱啟動PCR的核心成份為熱啟動DNA聚合酶。熱啟動酶活性位點被抗體封閉,僅在PCR變性加熱之后釋放酶活,避免了PCR體系配制過程中引物和模板的非特異擴增以及引物的截短,保證PCR擴增產物的特異性。熱啟動酶在常溫時酶活性封閉越好,PCR過程中的特異性越好。



          Ultra HiFidelity PCR Kit是由重組酶Ultra HiFi結合新型合成親和性配體與獨特配制的高效穩定擴增緩沖體系組成。其中Ultra HiFi DNA Polymerase是通過定向分子進化技術開發的新型快速高效熱啟動的高保真DNA聚合酶。兩種親和配體分別封閉DNA聚合酶的5’-3’聚合酶活性和3’-5’校正活性,需要通過95℃熱啟動程序才能釋放酶活。該反應體系采用TIANGEN獨特的K+-NH4+離子緩沖系統,保證引物和模板的高效結合,更加有助于長片段和低濃度模板下的擴增;體系內獨特的氫鍵調節因子可有效的消除擴增偏好性。



          Ultra HiFi具有熱啟動(Hot Start)功能,有效防止PCR反應前的引物錯配和引物降解,保證擴增產物的特異性。使用分子信標法(Ma et al., Anal Biochem, 2006)檢測不同高保真酶的熱啟動性,結果表明Ultra HiFi真正具有熱啟動活性,其余產品熱啟動活性差,在40-50℃時均有鏈退火和延伸能力。

          超強高保真PCR試劑盒


          Ultra HiFidelity PCR Kit






          產品特點


          操作簡便—2×預混Mix形式,只需加入模板及引物即可進行PCR

          高保真性—保真度為Taq聚合酶的50倍

          高特異性—具有優良的熱啟動性,保證產物特異性

          快速擴增—延伸速度可達10-15 sec/kb

          延伸力強—可擴增長至20 kb的DNA片段

          試用廣泛—試劑盒包含PCR Enhancer,適合于高GC和復雜模板擴增


          優良的高保真性,為Taq酶的50


          Ultra HiFi保真性是普通Taq酶的50 倍,以Taq酶(不具有矯正活性)的聚合保真性作為參比。


          極速擴增,短時完成長片段克隆


          Ultra HiFi對于小于4 kb 的片段,延伸速度可達5 sec/kb,長片段可適當延長延伸時間,使用30 sec/kb 的時間可擴增15 kb 以上片段。M:TIANGEN D15000 Marker


          普適性強、特異性高,不同來源的高GC和長片段均能輕易閱讀


          Ultra HiF具有高特異性,針對于不同類型模板保證擴增成功率及產物量。

          圖A. Ultra HiFi擴增結果

          圖B. 國外競品K公司高保真酶擴增結果

          圖C.國外競品N公司高保真酶擴增結果

          M:TIANGEN D15000 Marker

          Lan1-5. 不同長度模板擴增結果:1. 750 bp; 2. 1kb; 3. 2kb;4. 4kb; 5. 6kb

          Lan6. 高GC模板擴增結果:6.1915 bp (GC%為70%);

          Lan7-11. 多種基因組2kb模板擴增結果:7.大鼠; 8.水稻; 9.小麥; 10.玉米; 11.細菌; 

          lan12-14. 8 kb長片段擴增結果:

          12.水稻; 13.玉米; 14.細菌;

          lan15. 15 kb長片段擴增結果:15. λDNA (15kb)


          TIANGEN Ultra HiFi PCR Kit

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